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本文是学习GB-T 34918-2017 化妆品中七种性激素的测定超高效液相色谱-串联质谱法. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们

1 范围

本标准规定了超高效液相色谱-串联质谱法测定水状、乳状、膏状、面膜、粉状等化妆品中七种性激
素(雌三醇、雌二醇、雌酮、已烯雌酚、睾酮、甲基睾酮、黄体酮)的原理、试剂、仪器设备、样品处理、测定、

试验数据处理和实验报告等。

本标准适用于水状、乳状、膏状、面膜、粉状等化妆品中七种性激素的检测。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 原理

用甲醇+乙腈(1+1,体积比)混合溶剂漩涡提取化妆品中的性激素，离心过滤后，加入氢氧化钠溶
液进行皂化反应，调节pH
至6.5～7.5,经固相萃取小柱净化，用反相超高效液相色谱-串联质谱法测定，

内标法定量。

4 试剂或材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

4.1 GB/T 6682 规定的一级水。

4.2 甲醇：色谱纯。

4.3 乙腈：色谱纯。

4.4 乙酸铵。

4.5 氢氧化钠。

4.6 浓盐酸。

4.7 甲醇+乙腈(1+1,体积比):分别量取500 mL 甲醇(4.2)和500 mL
乙腈(4.3)充分混匀后制得。

4.8 乙酸铵溶液(0.5 mmol/L): 称取38.5 mg 乙酸铵(4.4),用水(4.1)溶解定容至1
L。

4.9 氢氧化钠溶液(20 g/L): 称取20.0g 氢氧化钠(4.5),用水(4.1)溶解定容至1
L。

4.10 盐酸溶液(10 mol/L): 量取833 mL 的浓盐酸(4.6),用水(4.1)溶解定容至1
L。

4.11 盐酸溶液(1 mol/L): 量取100 mL 的10 mol/L
盐酸溶液(4.10),用水(4.1)溶解定容至1 L。

GB/T 34918—2017

4.12 盐酸溶液(0.1 mol/L): 量取100 mL 的 1 mol/L
盐酸溶液(4.11),用水(4.1)溶解定容至1 L。

4.13 10%乙腈水溶液(体积比):量取100 mL 乙腈(4.3)和900 mL
水(4.1)充分混匀后制得。

4.14 纤维素滤纸。

4.15 pH 试纸：范围5.5～9.0。

4.16 HLB 固相萃取小柱或相当者：150 mg。

4.17 样品过滤器：有机膜，孔径0.22 μm。

4.18
标准品和同位素内标：雌三醇、雌二醇、雌酮、已烯雌酚、睾酮、甲基睾酮、黄体酮为标准品，雌三醇
D2、甲基睾酮 D3
为同位素内标，纯度不小于99.0%。7种标准品和2种同位素内标的英文名称、CAS
登录号、分子式、化学结构图参见附录 A。

4.19 内标储备液(100μg/mL): 准确称取同位素内标(4.18)各10.0 mg,
用甲醇(4.2)分别溶解定容至 100.0
mL,于(-4±1)℃下密封保存，可在一年内稳定。

4.20 标准储备液(1 mg/mL): 准确称取标准品(4. 18)各10.0 mg,
用甲醇(4.2)分别溶解定容至 10.0mL,
于(-4±1)℃下密封保存，可在一年内稳定。

4.21 混合内标使用液(1μg/mL): 准确量取内标储备液(4. 19)各1.00 mL,
用甲醇(4.2)定容于 100.0 mL,于(-4±1)℃下密封保存。

4.22
标准混合工作溶液：根据需要，用甲醇稀释，将各标准储备液(4.20)配制成0.025
μg/mL 、 0.050
μg/mL、0.20μg/mL、0.40μg/mL、0.80μg/mL系列浓度的标准曲线溶液后，各取1.00
mL 置于进样瓶中，并加入50 μL
混合内标使用液(4.21),制得标准混合工作溶液，标准混合工作溶液中各浓度
梯度含各同位素内标0.05 μg。

5 仪器设备

5.1 超高效液相色谱-串联质谱联用仪(配 ESI 源)。

5.2 分析天平：精度0.1 mg。

5.3 涡旋混合器。

5.4 离心机：转速10000 r/min;容量10 mL,50 mL。

5.5 固相萃取装置。

6 样品准备

6.1 提取

称取0.2 g 样品(精确至0.001 g)于 1 5 mL 具塞离心管中，准确加入2 mL
甲醇+乙腈(1+1,体积比)(4.7),涡旋震荡使样品溶液达到均质状态，10000
r/min 离心10 min, 吸取上层清液至另一50 mL 具塞离心管中，下层样品用2 mL
甲醇+乙腈(1+1,体积比)(4.7)重复提取一次，合并两次提取液后，加入35 mL
氢氧化钠溶液(20 g/L)(4.9), 混匀，10000 r/min 离心10 min
后，经纤维素滤纸(4.14)过滤后，分别加入10 mol/L 盐酸溶液(4.10)、1mol/L
盐酸溶液(4.11)和0.1 mol/L 盐酸溶液(4.12),调节清

液 pH 值至6.5～7.5之间，待固相萃取小柱净化。

6.2 净化

HLB 固相萃取小柱(4.16)接上固相萃取装置(5.5),小柱分别用5 mL
甲醇(4.2)、10 mL 水(4.1)进
行活化。将待净化的样品溶液倒入小柱中，待样品溶液完全流出后，加入10
mL10% 乙腈水溶液 (4.13)清洗小柱，弃去全部淋出液。在负压下，减压抽干1
min, 最后用5 mL 甲醇(4.2)洗脱，收集样品

洗脱液于15 mL 离心管中，转移样品洗脱液至5 mL
具塞比色管，用甲醇(4.2)定容至刻度液。经样品

GB/T 34918—2017

过滤器(4.17)过滤后，取1.00 mL 的样品溶液置于进样瓶中，并加入50μL
混合内标使用液(4.21),待

仪器测定。

7 测定

7.1 液相色谱/串联质谱参考条件

使用的仪器不同，最佳分析条件也可能不同，因此不可能给出仪器分析的通用色谱和质谱条件参
数。设定的参数应保证被测组分得到有效分离和测定，下面给出的色谱和质谱条件参数经证明是可

行的。

a) 色谱柱：Cx 柱，100 mm×2.1 mm(内径),1.8 μm, 或相当者；

b) 柱温：35℃;

c) 液相色谱流动相及参考分离条件见表1;

d) 进样体积：5μL;

e)
电离方式：电喷雾电离，雌三醇、雌二醇、雌酮、己烯雌酚采用ESI(一),睾酮、甲基睾酮、黄体酮
采用 ESI(+);

f) 正负离子喷雾电压：4.0 kV;

g) 雾化气：氮气，40 psi;

h) 干燥气：氮气，流速：10 L/min, 温度：300℃;

i) 碰撞气：氦气；

j) 检测方式：多反应监测(MRM);

k) 7 种性激素药物和2种同位素内标的质谱测定参数见表2。

表 1 液相色谱流动相及参考分离条件

时间 min	流速 mL/min	流动相A (水，0.5 mmol/L乙酸铵)	流动相B [甲醇+乙腈(1+1,体积比)]
0	0.3	40	60
4.5	0.3	5	95
7.0	0.3	5	95
8.0	0.3	40	60
10.0	0.3	40	60

表 2 7种性激素药物和2种同位素内标的质谱测定参数

序号	药物名称	出峰时间 min	电离方式	定性离子对(m/x) (母离子/子离子)	定量离子对(m/x) (母离子/子离子)	碰撞能量 eV	碎裂电压 V
1	雌三醇	1.82	ESI(一)	287.1/257.2 287.1/171.0	287.1/171.0	13 35	160 160
2	雌二醇	3.07	ESI(一)	271.1/183.0 271.1/145.1	271.1/183.0	35 35	160 160
3	雌酮	3.26	ESI(一)	269.1/159.0 269.1/145.1	269.1/145.1	40 35	190 190

GB/T 34918—2017

表 2 ( 续 )

序号	药物名称	出峰时间 min	电离方式	定性离子对(m/x) (母离子/子离子)	定量离子对(m/x) (母离子/子离子)	碰撞能量 eV	碎裂电压 V
4	己烯雌酚	3.53	ESI(一)	267.1/251.1 267.1/236.9	267.1/251.1	20 23	170 170
5	睾酮	3.33	ESI(+)	289.2/109.1 289.2/97.0	289.2/97.0	26 25	150 150
6	甲基睾酮	3.53	ESI(十)	303.5/108.9 303.5/97.1	303.5/97.1	30 28	150 150
7	黄体酮	4.07	ESI(十)	315.5/109.0 315.5/97.1	315.5/109.0	28 25	150 150
8	雌三醇D2	1.82	ESI(一)	289.1/172.7	289.1/172.7	35	150
9	甲基睾酮D3	3.53	ESI(十)	306.2/96.9	306.2/96.9	25	130

7.2 定性分析

在相同仪器分析条件下测定标准溶液和样品溶液，若样品溶液中检出的色谱峰保留时间与标准溶
液中的某种组分峰的保留时间一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，且所选
择的定性离子相对丰度与浓度相当标准工作溶液的定性离子的相对丰度进行比较时，偏差不超过规定

允许范围(见表3),则可判定样品中存在该组分。

表 3 定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度/%	>50	>20～50	>10～20	≤10
允许的相对偏差/%	±20	±25	±30	±50

7.3 定量分析

本标准采用内标法定量。

每次测定前配制标准浓度系列(4.22),按浓度由小到大依次测定，记录定量选择离子积分峰面积，
以目标物与内标物质的浓度比为横坐标，目标物与内标物质的峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线并计算

回归方程，其线性相关系数应大于0.99。标准品及同位素内标的超高效液相色谱-
串联质谱多反应监测

(MRM) 色谱图参见附录B。

单个物质的方法定量下限均为0.625 mg/kg。

8 试验数据处理

在相同仪器分析条件下测定样品溶液，选择目标离子进行定量，并根据标准曲线以内标法定量，按

式(1)计算含量。

style="width:1.97343in;height:0.61336in" /> ………………………… (1)

GB/T 34918—2017

式中：

X,— 样品中某种组分含量，单位为毫克每千克(mg/kg);

c;——
由标准曲线得出待测样品溶液中某种组分的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);

V — 定容体积，单位为毫升(mL);

b — 稀释倍数；

m — 样品质量，单位为克(g)。

测定结果以各性激素的含量分别表示，取两次平行测定结果的算术平均值，保留三位有效数字。

9 允许差

在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

10 试验报告

试验报告至少应给出以下内容：

a) 试样描述；

b) 使用的标准(包括发布或出版年号);

c) 试验结果；

d) 与规定的分析步骤的差异；

e) 在试验中观察到的异常现象；

f) 试验日期。

GB/T 34918—2017

附录 A

(资料性附录)

7种性激素的中文名称、英文名称、CAS
登录号、分子式、化学结构图及对应同位素内标

7种性激素的中文名称、英文名称、CAS
登录号、分子式、化学结构图及对应同位素内标见表 A.1。

表 A.1 7 种性激素的中文名称、英文名称、CAS
登录号、分子式、化学结构图及对应同位素内标

序号	中文名称	英文名称	CAS登录号	分子式	化学结构图		对应同位素内标
1	雌三醇	Estriol	50-27-1	C₁₈H₂₄O₃	II 二 H HO	OH IOII	雌三醇D2
2	雌二醇	Estradiol	50-28-2	C₁₈H₂₁O₂	OH II II II HO		雌三醇D2
3	雌酮	Estrone	53-16-7	C₁₈H₂₂O₂	0 H		雌三醇D2
3	雌酮	Estrone	53-16-7	C₁₈H₂₂O₂	IIO	二工	雌三醇D2
4	己烯雌酚	Diethylstilbestrol	6898-97-1	C₁₈H₂₀O₂			雌三醇D2
5	睾酮	Testosterone	58-22-0	C₁₉H₂₈O₂	OII H H H O		甲基睾酮D3

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表 A.1 ( 续 )

序号	中文名称	英文名称	CAS登录号	分子式	化学结构图				对应同位素内标
6	甲基睾酮	Methyltestosterone	58-18-4	C₂₀H₃₀O₂	I1 三 II 0	OII 二 1I			甲基睾酮D3
7	黄体酮	Progesterone	57-83-0	C₂₁H₃O₂	0、 II II Ⅱ O				甲基睾酮D3
8	雌三醇D2	Estriol-D2	53866-32-3	C₁₈H₂₂D₂O₃	H D. II H HO D		OII OH
9	甲基睾酮D3	Methyltestosterone-D3	96425-03-5	C₂₀H₂₇D₃O₂	IO H H H O		D	I I